光度計的光學系統(tǒng)基本上由三部分組成：光源（氘燈、鎢燈）、單色儀（光柵、狹縫）和檢測器（光電二極管、光電倍增管）。在我們使用的波長范圍內（通常紫外-可見光儀器在190nm～1100nm的范圍內），在不同波長（光源的發(fā)射強度、單色儀的色散強度和檢測器的放大率），上述組件的響應值是不同的；一般來說，即使沒有樣品，如果儀器不進行基線校準，吸光度或透射率在190nm至1100nm范圍內也不會是一條直線，這是一種客觀的物理現(xiàn)象。分光光度計的基線校準分為系統(tǒng)基線校準和用戶基線校準，下面我們就一起來看看具體的校準方法。

系統(tǒng)基線校準

系統(tǒng)基線的校準相對簡單。通常，樣品不在樣品室中放樣，僅校準光學系統(tǒng)；如果有必要使用全波段測量，那是另一回事。同時，應注意，系統(tǒng)基線不需要頻繁校準。通常，它可以半個月或一個月校準一次。對于某些儀器，系統(tǒng)基線校準過于頻繁，這將導致嚴重的基線漂移。

用戶基線校準

正確的校準方法是將兩個裝有空白溶液的反應杯分別放置在樣品和參考光路中，校準波長范圍大于分析波長范圍；例如，如果分析設置范圍為220nm～500nm，則校準波長應設置為210nm～510nm；等待校準完成，然后將波長設置回220nm～500nm的原始范圍。這種校準方法的優(yōu)點是：如果校準波長與分析波長一致，則在校準基線的兩端可能存在較大的噪聲；如果校準范圍大于實際分析范圍并且消除末端，則可以提高分析精度。

值得注意的是，一些儀器操作員在執(zhí)行基線校準時，沒有將參考溶液放在參考側，即他們使用空氣進行參考控制。這種方法可能對可見光區(qū)域的一些樣品影響很小，但在紫外區(qū)域效果會很明顯。嚴格來說，以空氣為參考測量的結果不是真實的校準光譜。

基線校準注意事項

（1）在基線校準期間，確保儀器有一定的預熱時間。

（2）每次更換參考溶液后，應再次進行基線校準。

（3）如果參考溶液的吸光度大于樣品的吸光度值，則測試結果為陰性。此時，有必要考慮使用哪種解決方案進行基線校準。

（4）在進行基線校準時，應考慮試劑的波長范圍，因為某些試劑在特定波長下的吸光度值將是無限的。此時，校準將超出儀器的有效范圍，無法獲得真實結果。目前，試劑的波長范圍一般標注在試劑瓶的標簽上。